Fermentas (Thermo Fisher Scientific) - знаменитые ферменты рестрикции и реактивы для молекулярной биологии

1. Эндонуклеазы рестрикции (рестриктазы)                                                                                                                                                                                                                            
2. Наборы для выделения нуклеиновых кислот (НК)   
3. Реактивы для ПЦР по конечной точке
    a. Стандартная ПЦР
    b. ПЦР в режиме горячего старта (hot-start, HS)
    c. ПЦР повышенной точности
    d. «Прямая» ПЦР
4. Реактивы для количественной ПЦР
5. Реактивы для обратной транскрипции
6. Наборы, ферменты и векторные плазмиды для клонирования
    a. Наборы со схемой клонирования aLICator LIC Cloning & Expression System
    b. Наборы для традиционного клонирования
    c. Наборы для получения компетентных клеток для трансформации
f401756505505354af0b6a6a0d5cf80f.jpg











1. Эндонуклеазы рестрикции (рестриктазы)

3.gif

Кроме обычных рестриктаз, предлагается серия FastDigest. В эту серию входят 176 ферментов, обладающих следующими отличиями от традиционных  рестриктаз:
  • все они активны в одном и том же буфере FastDigest Buffer, что позволяет проводить одновременнную рестрикцию несколькими рестриктазами;
  • время реакции при одной и той же концентрации фермента составляет 5-15 минут против нескольких часов при использовании стандартных рестриктаз;
  • буфер FastDigest пригоден для последующих модификаций ДНК после рестрикции (достройка концов, лигирование, фосфорилирование/дефосфорилирование);
  • ферменты FastDigest лишены неспецифической активности (Star Activity);
  • буфер FastDigest в модификации Green предназначен для нанесения образцов на гель для электрофореза непосредственно после рестрикции.
Все рестриктазы предлагаются в комплекте с соответствующим буфером, но можно приобрести отдельно любой буфер для рестрикции, а также буфер для разведения
рестриктаз, позволяющий ферменту сохранять активность в низкой концентрации.

2. Наборы для выделения нуклеиновых кислот (НК)

 1.gif





1. Наборы GeneJET - для ручного выделения НК колоночным методом сорбции на мембранах.
2. Наборы MagJET - для ручного и автоматического выделения НК на магнитных частицах.

Серия GeneJET Plasmid для выделения плазмидной ДНК.

Форматы:  mini – до 20 мкг ДНК, midi – до 200 мкг ДНК, maxi – до 750 мкг ДНК, а также в
формате Endo-Free maxi, предназначенном для получения ДНК с пониженным содержанием
бактериальных эндотоксинов (<0,1 ЕЭ/мкл) для последующей трансфекции эукариотических клеток.

Серия GeneJET Genomic DNA для выделения геномной ДНК.

Помимо базового набора  GeneJET Genomic DNA для выделения ДНК длиной свыше 30
т.п.н. из бактерий, дрожжей, клеток, тканей или образцов эпителия слизистой, предлагаются модификации:
GeneJET Whole Blood Genomic DNA – для выделения ДНК из цельной крови (обработанной антикоагулянтами, свежей или замороженной),
сухих пятен крови, других биологических жидкостей,
GeneJET Plant Genomic DNA – для выделения ДНК из растительных клеток,
GeneJET FFPE DNA – для выделения ДНК из фикисированных в формалине и обработанных парафином образцов.

Серия  GeneJET Total RNA для выделения суммарной РНК.

GeneJET RNA – для выделения РНК из бактерий, дрожжей, животных клеток и тканей (в т.ч. из лейкоцитарного осадка);
GeneJET Whole Blood RNA Mini – для выделения РНК из крови и др. биологических жидкостей экспресс-методом;
GeneJET Plant RNA - для выделения РНК из растительных клеток и тканей;
GeneJET Stabilized and Fresh Whole Blood RNA – для выделения особо чистой РНК из замороженной или цельной крови, в т.ч. взятой в пробирки с консервантами типа PAXgene.

Серия Viral DNA/RNA для выделения вирусных НК.

GeneJET Viral DNA/RNA - для лабораторных целей;
GeneJET Viral DNA/RNA IVD – для диагностических. В состав наборов входит реагент RNA Carrier, предохраняющий РНК от разрушения.

Серия GeneJET DNA Fragment для выделения фрагментов ДНК из реакционных смесей.

GeneJET PCR - для выделения ДНК из реакционных смесей  (ПЦР, рестриктазных, после мечения ДНК и др.);
GeneJET Gel Extraction – для выделения фрагментов ДНК из агарозных гелей обычных и легкоплавких;
GeneJET NGS Cleanup – для подготовки амплифицированных фрагментов ДНК к NGS секвенированию. Один из протоколов применения этого набора - для выделения фрагментов
ДНК до 150 п.н., а другой – для более эффективного удаления адаптеров; совместим с технологиями получения библиотек фрагментов для секвенирования Life Tech. и Illumina.

Серия GeneJET DNA & RNA Cleanup and Concentration Micro для дополнительной очистки НК.

GeneJET Gel Extraction and DNA Cleanup Micro – набор "3 в 1" для выделения ДНК из реакционных смесей или из агарозных гелей;
GeneJET RNA Cleanup and Concentration Micro – для дополнительной очистки РНК, выделенной другими методами или обработанной ДНКазой I.

Наборы MagJET для  выделения НК на магнитных частицах.

В качестве оборудования для выделения НК с помощью наборов MagJET рекомендуется использовать автоматические станции King Fisher (Thermo) 
или аналогичные. Также эта серия пригодна и для ручного выделения НК с использованием специальных магнитных  штативов MagJET Separation Rack
для 1,5 мл пробирок, 50 мл пробирок и 96-луночных планшетов.
В эту серию входят наборы, аналогичные таковым в серии GeneJET.
Стоит отметить некоторые наборы:
MagJET mRNA Enrichment для выделения фракции матричной РНК из суммарной РНК. Это происходит за счёт использования частиц, покрытых олиго-дТ.
MagJET NGS Cleanup and Size Selection для подготовки библиотек фрагментов при секвенировании, позволяющий произвести селекцию продуктов ПЦР нужной длины.

3. Реактивы для ПЦР по конечной точке

 1.png
Широкий выбор реактивов, наборов и мастер-миксов для обычной ПЦР, ПЦР в режиме горячего старта, ПЦР повышенной точности и ПЦР 
на неочищенной ДНК. В зависимости от задач эксперимента  можно подобрать реагенты для ПЦР длинных последовательностей, быстрой ПЦР
и мультиплексной ПЦР. Наиболее известными продуктами являются ДНК-полимеразы Phusion и DreamTaq, а также наборы и мастер-миксы с этими полимеразами. 

ДНК-полимеразы для обычной ПЦР

ДНК-полимераза Taq, нативная и рекомбинантная.
Самый распространённый фермент для рутинной амплификации фрагментов до 5 т.п.н. Нативная Taq-полимераза предпочтительнее в случае амплификации 
бактериальных ДНК. И нативная, и рекомбинантная Taq-полимеразы способны встраивать модифицированные нуклеотиды (в т.ч. dUTP) и обладают 
дезоксинуклеотидилтрансферазной активностью, что приводит к наличию дополнительного остатка аденина на 3'-концах ПЦР-продукта.
Эта особенность используется при ТА-клонировании.

ДНК-полимераза DreamTaq.
Это Taq-полимераза способна синтезировать более длинные последовательности (до 6 т.п.н.) и обладает повышенной специфичностью и продуктивностью 
по сравнению с обычной Taq-полимеразой. Для DreamTaq предлагается бесцветный буфер (для анализа ПЦР-продуктов спектрофотометрическими методами) 
или буфер DreamTaq Green, содержащий маркерные красители и реагент с повышенной плотностью (для электрофоретического анализа продуктов ПЦР). 
Полимераза DreamTaq также добавляет дополнительный остаток аденина на 3'-концах продукта ПЦР, но не способна включать в синтезируемую цепь ДНК dUTP. 

ДНК-полимераза DyNAzyme II.
Это Taq-подобный рекомбинантный фермент, обладающий повышенной термостабильностью (время полужизни при +96 – до 2,5 часов) 
и устойчивостью к ДМСО, формамиду и глицерину (до 10%).

ДНК-полимераза ThermoPrime.
Обладает повышенной термостабильностью в сочетании с увеличенным выходом продукта ПЦР. Это обеспечивается за счёт специального буфера. ПЦР-продукт, 
полученный с помощью ThermoPrime, несёт дополнительный остаток аденина на 3'-концах. Эта полимераза есть также в виде мастер-микса, в т.ч. ReddyMix 
с инертным красным красителем. Ещё один вариант полимеразы ThermoPrimeRed Hot Taq DNA Polymerase. К полимеразе добавлен инертный красный краситель, 
являющийся индикатором наличия фермента в реакционной смеси. 
ДНК-полимеразы для ПЦР в режиме горячего старта

ДНК-полимераза Maxima Hot Start. 
Это химически модифицированная Taq-полимераза, неактивная при комнатной температуре, что позволяет избежать неспецифического синтеза ДНК.
Фермент активируется при инкубации в течение 4 минут при +95. Остальные характеристики – такие же, как и у обычной Taq-полимеразы.
Предлагается также в виде мастер-микса (бесцветного или с маркерными красителями).

ДНК-полимераза Phire Hot Start II.
Самая эффективная из представленных на рынке Taq-полимераз Hot Start; обладает повышенной в 2 раза точностью (относительно Taq-полимеразы),
синтезирует более длинные фрагменты (до 20 тысяч п.н.) со скоростью тысяча нуклеотидов/10-15 секунд (в 4 раза быстрее Taq-полимеразы) и не требует
дополнительного прогрева для начала работы; синтезирует ПЦР-продукт с тупыми концами; есть также в виде мастер-микса (бесцветного или с маркерными красителями).

ДНК-полимераза TrueStart Hot Start.
Также, как и Phire, не требует дополнительного прогрева для активации; добавляет дополнительный остаток аденина на 3'-концах продукта ПЦР;
для амплификации последовательностей до 3 тысяч п.н.

ДНК-полимеразы для ПЦР повышенной точности

ДНК-полимераза Pfu, нативная и рекомбинантная.
Полимеразы Pfu отличаются от Taq-полимераз повышенной точностью (до 8 раз) благодаря корректирующей 3'è5'-экзонуклеазной активности, а также тем,
что полученный с их помощью продукт амплификации обладает тупыми концами, что удобно для клонирования.

ДНК-полимеразы Phusion High-Fidelity.
Ферменты повышенной точности, несущие ДНК-связывающий домен полимеразы микроорганизмов Pyrococcus. Точность этих полимераз превосходит точность
Тaq-полимеразы минимум в 25 раз. Также эти полимеразы синтезируют длинные последовательности (до 20 т.п.н.), обладают более высокой скоростью синтеза (2-4 тысячи п.н. в минуту)  
и улучшенной способностью амплифицировать GC-богатые последовательности. В данную серию входят полимеразы Phusion High-Fidelity,
Phusion Hot Start II High-Fidelity (модифицированная для горячего старта), Phusion Flash High-Fidelity (для быстрой ПЦР) и Phusion U Hot Start (способна встраивать dUTP).
Все полимеразы Phusion дают ПЦР-продукт с тупыми концами. Для амплификации GC-богатых последовательностей предлагается
мастер-микс Phusion High-Fidelity PCR Master Mix со специальным GC-буфером.

Наборы для «прямой» ПЦР (без предварительно выделения ДНК) серии Direct PCR

 1.jpg При прямой ПЦР не требуется выделение ДНК из биологического материала. Это позволяет экономить время и материальные ресурсы  в случае большого
количества образцов, а также удобно в ситуации, когда очень мало исходного материала для выделения ДНК, и потери оказываются критическими.
При прямой ПЦР требуется очень небольшое количество исходного образца, размер его не превышает 0,5 мм. Для удобства отбора столь малых проб
предлагается устройство Direct PCR Tissue Puncher, позволяющее отбирать образцы животных и растительных тканей размером 0,3 мм. В наборах
для проведения прямой ПЦР Direct PCR Kits используются полимеразы Phusion или Phire, устойчивые к действию ингибиторов. Можно ставить амплификацию
непосредственно на образце или предварительно обработать образец специальным буфером и сделать несколько аликвот.

Phusion Human Specimen Direct PCR для работы с волосами, ногтями, эпителием из ротовой полости, амниотической жидкостью, зубами; как для свежих образцов, 
так и для замороженных или фиксированных в формалине и парафине.

Phire Tissue Direct PCR Master Mix для работы с животными тканями из различных организмов – для образцов с большим количеством ингибиторов ПЦР или фиброзных волокон.

Phire Animal Tissue Direct PCR для работы с животными тканями из различных организмов, содержит универсальные праймеры для позитивного контроля.

Phusion Blood Direct PCR – набор и мастер-микс для прямой ПЦР образцов крови человека и животных, содержащих различные антикоагулянты. Полимераза, входящая 
в эти наборы, устойчива к действию ингибиторов ПЦР и активна даже в тех случаях, когда кровь составляет до 40% от объема ПЦР-пробы.

Phire Plant Direct PCR – набор и мастер-микс для прямой ПЦР растительных образцов; полимераза, входящая в эти наборы, устойчива к действию ингибиторов ПЦР 
из растительной ткани – полисахаридам, полифенолам и др.; в набор также входит комплект универсальных праймеров для амплификации консервативной области 
ДНК хлоропластов с целью положительного контроля.

4. Реактивы для количественной ПЦР

 2.jpg  




Thermo Scientific (Fermentas) предлагает несколько серий мастер-миксов для количественной ПЦР под наименованием SYBR Green qPCR Master Mixes,
содержащих интеркалирующий краситель SYBR Green

Серия Luminaris HiGreen qPCR - мастер-миксы, содержащие Taq-полимеразу, а также урацил-ДНК-гилкозилазу и УТФ для предотвращения контаминации неспецифическими ДНК, 
синий краситель и желтый буфер, которые при смешивании дают зеленый цвет и предназначены для контроля внесения компонентов в ПЦР-смесь; есть мастер-миксы, 
содержащие пассивные красители для нормализации реакции – ROX в разных концентрациях или флюоресцеин:

Luminaris Color HiGreen High ROX, 
Luminaris Color HiGreen Low ROX,
Luminaris Color HiGreen Fluorescein;
Luminaris HiGreen High ROX, 
Luminaris HiGreen Low ROX,
Luminaris HiGreen Fluorescein.

Исследователю надо только добавить ДНК и праймеры.
Мастер-миксы Luminaris HiGreen qPCR и Luminaris Color HiGreen qPCR рассчитаны на работу с практически любыми амплификаторами для количественной ПЦР
(BioRad CFX 96, BioRad CFX 384 Touch, Corbett RotorGene, Eppendorf MasterCycler), мастер-миксы с флюоресцеином предназначены для амплификаторов производства Bio-Rad,
а мастер-миксы с ROX – для амплификаторов Applied Biosystems серий StepOne и 7000-х серий

Аналогичные мастер-миксы выпускаются с ДНК-полимеразой Maxima Hot Start. В данной серии предлагаются мастер-миксы с контрольными красителями ROX:
Maxima SYBR Green/ROX qPCR Master Mix для амплификаторов  Applied Biosystems серий StepOne и 7000-х серий;
Maxima SYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix для амплификаторов Bio-Rad
Maxima SYBR Green qPCR Master Mix универсальный, к которому прилагается отдельная пробирка с раствором ROX.

Cерия мастер-миксов DyNAmo содержит модифицированную ДНК-полимеразу. К полимеразе присоединён ДНК-связывающий домен, обеспечивающий
физическую стабильность комплекса ДНК-полимераз. В этой серии предлагаются мастер-миксы для быстрого ПЦР DyNAmo Flash SYBR Green qPCR Kit и
DyNAmo ColorFlash SYBR Green qPCR Kit,
а также для обычной ПЦР DyNAmo HS SYBR Green qPCR Kit, включающий также отдельную пробирку с ROX. В состав всех мастер-миксов входит дУТФ для предотвращения
контаминации неспецифической ДНК.

Серия мастер-миксов ABsolute qPCR SYBR Green содержит полимеразу горячего старта Thermo-Start, обладающую повышенной специфичностью. 
В данной серии представлены мастер-миксы с красителями ROX и флюоресцеином, а также без контрольного красителя в двух форматах – с инертным красителем синего 
цвета для удобства работы и без него. Также в серии имеется мастер-микс ABsolute QPCR Capillary SYBR Green Mix, оптимизированный для капиллярных инструментов.

 3.jpg  





Серии мастер-миксов Probe Master Mixes предназначены для экспериментов с количественной ПЦР, в которых не требуется использование
интеркалирующих красителей – при детекции продуктов ПЦР с помощью праймеров-зондов. В этих сериях представлены те же самые мастер-миксы,
что и в SYBR Green qPCR Master Mixes, но не содержащие SYBR Green.

5. Реактивы для обратной транскрипции

Обратные транскриптазы и наборы для обратной транскрипции c ПЦР, синтеза первой цепи кДНК и для обратной транскрипции с количественной ПЦР.

Для реакции обратной транскрипции – обратная транскриптаза M-MuLVRT и её модифицированные варианты – RevertAid, RevertAid Premium и Maxima.

Они отличаются друг от друга термостабильностью (оптимальной рабочей температурой) и длиной синтезируемой цепи ДНК(+37 и  9000 п.н. для M-MuLVRT, +42 и 13000 п.н. 
для RevertAid, +50 и 20000 п.н. для RevertAid Premium и +55 и 20000 п.н. для Maxima). Для Maxima температура реакции может быть повышена до +65. M-MuLVRT обладает 
РНКазной активностью, RevertAid Premium её лишена, а RevertAid и Maxima выпускаются в двух модификациях – с РНКазной активностью и без неё (Н minus).

Для синтеза кДНК – наборы cDNA Synthesis или First Strand cDNA Synthesis.

Эти наборы содержат одну или несколько обратных транскриптаз, ингибитор РНКазы RiboLock (только в наборах с обратной транскриптазой без РНКазной активности), 
реакционный буфер, смесь трифосфатов и праймеры – случайный 6-нуклеотидный или случайный 6-нуклеотидный в сочетании с олиго(дТ)18 или 15. Основные продукты в этой серии -   
RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit и Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit, содержащие, соответсвенно, обратную транскриптазу RevertAid или Maxima
Эти же наборы выпускаются в модификации H minus – обратная транскриптаза при этом не обладает РНКазной активностью. Также наборы с обратной транскриптазой Maxima 
выпускаются в модификации, содержащей генно-инженерную ДНКазу, расщепляющую двухцепочечную ДНК. Это удобно для элиминации загрязнения геномной ДНК 
(в первую очередь – при получении библиотек кДНК). Для рутинной обратной транскрипции предлагается набор RevertAid RT Reverse Transcription Kit, содержащий только случайный 
6-нуклеотидный праймер и не содержащий олиго-дТ-праймеров. Набор DyNAmo cDNA Synthesis Kit предназначен для синтеза первой цепи кДНК 
с целью последующей количественной ПЦР при длине ампликонов до 100 п.н.

Для обратной транскрипции с последующей ПЦР в 1 стадию – наборы Verso 1-Step RT-PCR Kit ReddyMix и Verso 1-Step RT-PCR Kit Hot Start.

Набор Verso 1-Step RT-PCR ReddyMix содержит ДНК-полимеразу ThermoPrime Taq и обратную транскриптазу Verso, сохраняющую активность до +57, что позволяет 
транскрибировать области РНК, содержащие вторичные структуры. Также в этот набор может быть включен маркерный краситель ReddyMix для удобства анализа реакционной смеси электрофорезом.

Набор Verso 1-Step RT-PCR Hot Start содержит ДНК-полимеразу Thermo-Start с функцией горячего старта и обратную транскриптазу Verso. В состав обоих 
наборов входит реагент RT Enhahcer (опционально) для элиминации примесей геномной ДНК в ходе обратной транскрипции (требуется добавление ДНКазы I).

Аналогичные наборы имеются для обратной транскрипции с последующей количественной ПЦР - Verso 1-Step RT-qPCR Kit и Verso 1-Step RT-qPCR SYBR Green Kit
Они отличаются от наборов для обратной транскрипции с последующей ПЦР наличием красителя ROX в составе мастер-микса или в виде отдельной пробирки.

6. Наборы, ферменты и векторные плазмиды для клонирования

 2.gif

Наборы для клонирования

Наборы со схемой клонирования aLICator LIC Cloning & Expression System
В основе этой схемы – так называемое лигаза-независимое клонирование (LIC), позволяющее обходиться без рестрикции продукта ПЦР и его лигирования с векторной плазмидой. 
При этом используется ДНК-полимераза Т4, обладающая 3'à5'-экзонуклеазной активностью. По методике LIC реакция с участием полимеразы Т4 идёт в присутствии дГТФ, поэтому 
отщепление нуклеотидов на 3'-концах продукта ПЦР идёт до тех пор, пока в комплементарной цепи не встретится цитозин. В результате у продукта ПЦР образуются длинные липкие концы, 
комплементарные специфическим сайтам клонирования векторной плазмиды серии pLATE, входящей в набор для клонирования. После отжига плазмиды и ПЦР-продукта смесь 
трансформируется в компетентные клетки E.coli. Плазмиды серии pLATE предназначены для индуцируемой экспрессии векторного белка с минимальной фоновой экспрессией. 
В этих плазмидах ген клонируется под контроль промотора Т7, распознаваемого РНК-полимеразой Т7. Для трансформации конструкций используются штаммы E.coli, в которых
 экспрессия РНК-полимеразы Т7 находится под контролем индуцируемого промотора, например, lacUV5 (штаммы BL21(DE), HMS174(DE)). После добавления индуктора (IPTG) в клетках 
начинает синтезироваться РНК-полимераза Т7, осуществляющая транскрипцию генов под контролем промотора Т7. В серию рLATE входят плазмиды, позволяющие получать немодифицированный 
рекомбинантный белок или белок с концевыми олигогистидиновыми последовательностями для последующей очистки методом металл-хелатной хроматографии. Олигогистидиновая 
последовательность может быть отщеплена энтерокиназой или протеазой WELQut. Такая система регуляции активности удобна, например, при экспрессии генов, токсичных для E.coli. 
Для клонирования по схеме LIC – наборы aLICator LIC Cloning and Expression Kits, содержащие ДНК-полимеразу Т4, специальный буфер LIC, праймеры для секвенирования, один или 
несколько векторов серии pLATE и контрольные плазмиду и ПЦР-фрагменты. В виде отдельного компонента предлагается рекомбинантная протеаза WELQut для отщепления 
олигогистидиновой последовательности.
Наборы для «классического» клонирования
Набор CloneJET PCR Cloning Kit предназначен для традиционного клонирования ПЦР-продукта в векторную плазмиду pJET1.2/blunt, расщепленную удобной рестриктазой в области полилинкера.
Особенность заключается в том, что полилинкер для клонирования находится внутри гена eco47IR, кодирующего летальную рестриктазу и находящегося под контролем IPTG-индуцируемого промотора.
Таким образом, выживают только те клетки, которые содержат ПЦР-вставку, нарушающую структуру гена eco47IR. Происходит селекция клонов, и дальнейший отбор производится только
с целью контроля ориентации и копийности вставки (при клонировании по тупым концам). В состав набора входят ДНК-лигаза Т4, фермент для получения тупых концов ПЦР-продукта, праймеры
для секвенирования, векторная плазмида и контрольный ПЦР-фрагмент. Набор пригоден для клонирования ПЦР-продуктов, полученных с помощью любой ДНК-полимеразы. Лигирование осуществляется
с помощью ДНК-лигазы Т4 в оптимизированном буфере в течение 5 минут, что в 10 раз быстрее стандартного лигирования. Набор для лигирования также предлагается в виде отдельного продукта -
Rapid DNA Ligation. Трансформация лигазной смеси может быть осуществлена во все основные лабораторные штаммы Е.coli как химически, так и электропорацией. Реагент для получения тупоконечного
ПЦР продукта можно приобрести отдельно – в виде набора Fast DNA End Repair.
Поскольку многие полимеразы дают ПЦР-продукт с выступающими на 3'-концах dA – то для удобства клонирования таких продуктов без дополнительной экзонуклеазной обработки предназначен набор
InsTAclone PCR Cloning. В состав входит линеаризованный вектор pTZ57R, несущий на 3'-концах в области расщепления остатки ddT, что препятствует его спонтанному замыканию в кольцо.
Этот сайт клонирования находится внутри полилинкера, который, в свою очередь, расположен внутри гена lacZ, что обеспечивает цветную селекцию клонов со вставкой. Продукты, полученные
с помощью этого набора, пригодны для трансформации во все основные лабораторные штаммы Е.coli как химически, так и электропорацией.

Набор для получения компетентных клеток для трансформации
Получение компетентных клеток – довольно сложная процедура, связанная с приготовлением многокомпонентных стерильных растворов и требующая значительных затрат времени.
При этом любая ошибка может привести к тому, что клетки окажутся низкоэффективными. Для того, чтобы существенно облегчить эту процедуру, Thermo Scientific (Fermentas)
предлагает набор TransformAid Bacterial Transformation, предназначенный для приготовления химически компетентных клеток E.coli из ночных культур или колоний на чашке.
Основной компонент этого набора – раствор Т. Эффективность метода  – 107 колоний трансформантов на 1 мкг ДНК. Процесс получения компетентных клеток занимает около часа
для ночной культуры или 2,5 часа для колоний. Для сравнения – традиционный метод занимает около 6 часов! Метод пригоден для всех основных лабораторных штаммов E.coli –
JM-109, JM-107, XL-1 Blue, NM527, BL21 и др.