Ambion (Thermo Fisher Scientific) – лучшее для работы с РНК

 Ambion_Logo.png       Ambion (Thermo) специализируется на разработке и производстве продукции для
исследования РНК, начиная с выделения РНК и заканчивая анализом транскриптома.
Поскольку РНК, в отличие от ДНК, менее стабильна, то работа с РНК требует гораздо
большей точности и аккуратности, а требования к чистоте и качеству
реактивов – более высокие. Продукция Ambion соответствует всем этим требованиям.
 f401756505505354af0b6a6a0d5cf80f.jpg       

1. Выделение РНК

Этот этап наиболее важен, так как именно от него зависит качество РНК, что определяет ход всей дальнейшей работы. Даже если начать 
выде ление РНК непосредственно после взятия биологического образца, денатурирующие агенты не начинают действовать мгновенно.

РНК-стабилизирующие реагенты

Стабилизирующий раствор RNAlater Stabilization Solution позволяет хранить биологический образец без ферментативного разрушения РНК 
при к.т. в течение недели или при +4 в течение месяца.
 
Стабилизирующий раствор RNAlater ICE Frozen Tissue Transition Solution предназначен для предотвращения разрушения РНК при оттаивании.
Быстрое замораживание при температуре -80 позволяет сохранить РНК без использования стабилизирующего раствора, но при оттаивании образцов все равно
происходит разрушение РНК. Образец, обработанный RNAlater ICE и замороженный, может находиться при комнатной температуре до 30 минут, при этом РНК не
подвергается ферментативному расщеплению. Этот раствор позволяет хранить замороженные биологические образцы в течение неограниченного времени.

Буфер THE RNA Storage Solution предназначен для хранения чистой РНК после выделения, рН 6,4, содержит цитрат натрия в качестве хелатирующего агента.
Буфер не препятствует последующим манипуляциям с РНК, таким, как обратная транскрипция или блоттинг.

Наборы и реагенты для выделения РНК

Выбор набора для выделения РНК в зависимости от
  • материала (кровь, другие биологические жидкости, клеточные культуры, растительные и животные ткани, бактерии, дрожжи, биопсийные образцы, обработанные формалином и парафином, экзосомы, бесклеточные образцы),
  • типа выделяемой РНК (суммарная РНК, мРНК, микроРНК),
  • экспериментальных задач (синтез специфической кДНК, анализ экспрессии генов, секвенирование РНК и т.д.)
Ambion предлагает наборы для выделения РНК как колоночным методом, так и с помощью магнитных частиц https://www.thermofisher.com/ru/ru/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/rna-extraction.html 

TRIzol Reagent – инактивирующий РНКазу и денатутрирующий белки реагент, применяемый для получения суммарной РНК из биологических жидкостей
(кровь и др.), клеточных культур, животных тканей. 
 

 6.jpg
Из обработанного TRIzol образца можно выделять РНК как с помощью фенольной экстракции, так и с помощью готовых наборов.
Модификация TRIzol LS Reagent - для биологических жидкостей.
Набор TRIzol Plus RNA Purification Kit - для выделения РНК из большинства биологических образцов.

PureLink RNA Kits – серия колоночных наборов для выделения РНК из практически любых биологических образцов в относительно небольших количествах
(до 200 мг ткани или до 108 клеток), особенность – быстрота выделения (не более 20 минут) и отсутствие токсичных реагентов. Набор PureLink Total RNA
Blood - для выделения РНК из крови, PureLink RNA Mini – для выделения РНК из ткани и т.д.

 7.gif MagMAX RNA Isolation Kits –  наборы для автоматизированного выделения РНК с использованием магнитных частиц. Ambion предлагает различные наборы с технологией MagMAX  
для работы с вирусами, кровью или биопсийными образцами, фиксированными в формалине и парафине. Наборы MagMAX применяются в сочетании с автоматическими станциями
серии MagMAX Express Magnetic Practicle Processor.

mirVana miRNA Isolation - наборы для выделения небольших молекул РНК от 10 до 200 нуклеотидов, например, микроРНК (в случае стандартных наборов для выделения РНК
молекулы короче 300 нуклеотидов как правило, элиминируются); как правило – на магнитных частицах с технологией MagMAX, но есть и колоночный набор для выделения
микро РНК из растений. Набор mirVana PARIS RNA and Native Protein Purification - для одновременного выделения РНК и белков, что даёт возможность соотнести количество РНК и белка в образце.

 2.png   Dynabeads mRNA Purification Kits - наборы для выделения матричной РНК на основе магнитных частиц Dynabeads, покрытых олиго(dT).
В серии имеются наборы DIRECT для выделения фракции мРНК из биологического образца, а также набор для выделения мРНК из суммарной РНК.

Cells-to-CT Kits – наборы для анализа уровня экспресии генов без предварительного выделения РНК с последующей детекцией продукта ПЦР как с помощью SYBR Green, так и
с помощью технологии TaqMan. Набор Single Cell-to-Ct - для работы с единичными клетками.

 7.jpg Расходный пластик: наконечники для сэмплеров, микропробирки и др., вода, буферные растворы и другие реагенты (например, протеиназа К),
характеризующиеся степенью чистоты Nuclease-free.


2. Работа с микро РНК

В последние годы получила широкое распространение технология использования микро РНК, например, использование малых интерферирующих 
РНК (siRNA – small interfering RNA) с целью подавления или активации экспрессии отдельных генов. Ambion (Thermo) предлагает различные серии микроРНК, 
в зависимости от стоящих перед экспериментатором задач.

Синтетические микроРНК

Ambion Pre-miR miRNA Precursors – cинтетические двухцепочечные микроРНК, имитирующие природные зрелые микроРНК. Эти микроРНК  вносятся в клетку 
трансфекцией или электропорацией и предназначены для функционального анализа и поиска мест связывания микроРНК.

Ambion Anti-miR miRNA Inhibitors – готовые для трансфекции молекулы, ингибирующие эндогенные микроРНК.

mirVana miRNA Mimics and Inhibitors – химически модифицированные  двухцепочечные (Mimics) или одноцепочечные (Inhibitors) РНК для активации эндогенных 
микроРНК и анализа их функциональной активности. Это следующее поколение имитаторов микроРНК, обладающее повышенной специфичностью.

Малые интерферирующие РНК (siRNA)

 10.jpg Silencer siRNA – синтетические высокоспецифичные микроРНК для нокдауна мРНК. Предлагаются в формате siRNA для отдельных генов (всего более 20000 вариантов)
и в формате библиотек для функциональных групп генов (киназы, фосфатазы и т.д.)  - готовых (Pre-made)  или на заказ (Made to Order). Библиотеки siRNA существуют
в формате 96 и 384-луночных плашек.  Оптимальный продукт по соотношению «цена-качество».

Stealth RNAi Pre-Designed siRNA – готовые siRNA для ингибирования большинства человеческих, мышиных и крысиных генов. По сравнению с серией Silencer – более 
точно валидированы на предмет неспецифического взаимодействия.
Silencer Select Pre-Designed & Validated siRNA - новое поколение siRNA с максимальной специфичностью. Эти РНК способны связываться как 
с кодирующими, так и с некодирующими последовательностями.

На сайте https://rnaidesigner.thermofisher.com/rnaiexpress/ предлагается онлайн-сервис для расчёта последовательностей siRNA 

3. Реагенты для секвенирования РНК

 15.jpg RiboMinus Eucariote Kit  - набор для удаления рибосомальных РНК при пробоподготовке для секвенирования транскриптома. В основе – метод магнитных частиц. 
Аналогичный набор Low Input RiboMinus Eukaryote System - для работы с образцами РНК до 1 мкг.

RiboMinus Transcriptome Isolation Kits – видоспецифичные наборы для удаления рибосомальных РНК. Предлагаются наборы для человека, мыши, бактерий, дрожжей. 

4. Бестселлеры Ambio (Thermo)

RiboPure RNA Purification Kit, blood – набор для выделения РНК из крови.

TRIzol Reagent – лизирующий раствор для выделения РНК из клеток.

TaqMan Gene Expression Cells-to-CT Kit – набор для анализа экспрессии генов.