Pierce (Thermo Fisher Scientific) – продукция для белковых исследований

1. Диализ белков                                                                                                                                                                                              
2. Вестерн-блоттинг 
3. Реактивы для лизиса клеток и фракционирования продуктов лизиса              
4. Реактивы для белкового анализа
f401756505505354af0b6a6a0d5cf80f.jpg  


1. Диализ белков

Продукция Pierce (Thermo Scientific) для диализа даёт возможность диализовать образцы в широком диапазоне объёмов от 10 мкл до 250 мл.
Специальные диализные ёмкости не требуют применения клипс и других дополнительных приспособлений, что позволяет сэкономить
время и избегать потерь или загрязнений образца.

Серия Slide-A-Lyser

Продукты в этой серии снабжены MWCO-мембраной (molecular weight cut-off), предназначенной для диализа молекул с молекулярным весом до 2; 3,5; 7; 10 или 20 кДа. 
 1.jpg


Ёмкости для диализа малых образцов Slide-A-Lyser MINI для диализа образцов до 2 мл, выпускаются в 3 модификациях: 0,1; 0,5 и 2 мл.    
Ёмкости 0,5 и 2 мл по диаметру соответствуют пробиркам типа Falcon 15 и 50 мл, соответственно.

 2.jpg

  Кассеты для диализа Slyde-A-Lyser

  Предназначены для диализа образцов объёмом от 100 мкл до 30 мл. Выпускаются в 4 модификациях для разных объёмов – 0,1-0,5 мл,
 0,5-3 мл, 3-12 мл и 12-30 мл. В отличие от диализных мешков, позволяют сохранить до 99% от первоначального объёма образца.
 3.jpg



Кассеты для диализа Slyde-A-Lyser G2 - второе поколение диализных кассет Slyde-A-Lyser. Основные отличия: возможно заполнение с помощью
сэмплера (предыдущее поколение – заполнение только шприцем), оригинальная конструкция придаёт кассете плавучесть в вертикальном положении
(для предыдущего поколения требуется дополнительный поплавок). Также расширена линейка объёмов – до 5 вариантов, макс. – 70 мл.

 4.jpg    

 Плашки для микродиализа

 Предназначены для диализа образцов малого объёма от 10 до 100 мкл в 96-луночном формате. Представляют собой картриджи из 8 диализных устройств.
 Предлагаются с мембранами MWCO до 3,5 или до 10 кДа. Возможно использовать плашки в автоматических устройствах, поддерживающих 96-луночный формат.
 Важная особенность плашек – быстрый диализ образцов (2-4 часа).
 5.jpg    


 Диализные мешки SnakeSkin

 Предназначены для традиционного диализа, но, в отличии от других диализных мешков, не требуют предварительной подготовки (кипячения и др.) 
 Ёмкость мешков – от 2 до 10 мл/см; форматы MWCO: 3,5; 7 и 10 кДа.

2. Вестерн-блоттинг

Pierce предлагает наборы реагентов на основе субстратов для пероксидазы хрена, предназначенные для хемилюминесцентной детекции белков при вестерн-блоттинге. Также под маркой Pierce
предлагается модуль для переноса белков Pierce Power Blotter.
6.jpg

Стандартные ECL (enhanced chemiluminescence) субстраты

Главные преимущества по сравнению с аналогичными субстратами других производителей  – низкая цена и высокая воспроизводимость результатов. Предназначены для 
детекции стандартных вестерн-блотов с помощью рентгеновской плёнки или CCD-устройств. Модифицированный субстрат ECL Plus - для визуализации блотов с низкой концентрацией 
исследуемого белка (до 0,5 пг), характеризуется большей продолжительностью свечения (до 5 часов) и даёт возможность детекции сигнала также с помощью лазерных устройств.

Хемилюминесцентные субстраты SuperSignal

Характеризуются большей продолжительностью свечения - до 24 часов для субстрата SuperSignal West Dura и высокой чувствительностью от нескольких пг белка для SuperSignal West Pico
до нескольких фг белка для SuperSignal West Femto.

7.jpg

Наборы для вестерн-блоттинга Fast Western Blot Kits

В состав этих наборов, помимо субстратов Pierce ECL или SuperSignal, входят все необходимые реагенты для блокировки неспецифического
связывания и визуализации блотов, обработанных первичными антителами мыши или кролика. Преимущество этих наборов в том, что процесс
занимает около часа (в отличие от 4 часов, необходимых при использовании традиционной методики). В серию Fast Western входят 4 набора,
отличающихся чувствительностью (в зависимости от субстрата в составе набора).
 16.jpg

Модуль для переноса белков Pierce Power Blotter

Модуль Pierce Power Blotter предназначен для быстрого полусухого переноса белков из полиакриламидного геля на нитроцеллюлозную или 
ПВДФ-мембрану, используя источник тока Pierce Power Station. Можно одновременно осуществлять перенос белков из 4 гелей формата «мини» или двух 
гелей формата «миди». Процесс занимает около 10 минут. Можно использовать  как самодельные, так и готовые буфер и фильтры Pierce. Модуль Pierce Power Blotter 
является съёмным; к Pierce Power Station можно подключить другой модуль - Pierce Power Stainer для окраски белковых гелей по Кумасси.


3. Реактивы для лизиса клеток и фракционирования продуктов лизиса

Реактивы обеспечивают высокий выход белка и сохранение его активности. Можно выбрать набор для выделения белка в зависимости от типа клеток (клетки различных тканей и органов
млекопитающих, растительные клетки, бактерии, дрожжи и т.д.) или от локализации белка в клетке (суммарный белок, поверхностные белки, трансмембранные белки, цитоплазматические белки,
белки цитоскелета, хроматин-связанные белки, белки из органелл).

8.jpg 9.jpg
Реагенты для клеточного лизиса (экстракции суммарного белка)

В зависимости от типа лизируемых клеток можно выбрать наиболее подходящий реагент из линейки PER (Protein Extraction Reagent
T-PER - для животных тканей,
N-PER - для нервной ткани,
M-PER - или RIPA для культур эукариотических клеток,
B-PER - для бактерий,
P-PER - для растений и т.д.

Детергенты неионнные и ионные:  Triton X-100, Triton X-114, NP-40, Brij-35, Tween-80, SDS, октилглюкозид, CHAPS и др. Детергенты Surfact-Amps представляют собой 10% растворы,
расфасованные в ампулы или специальные ёмкости, заполненные азотом, что предотвращает их перекисное окисление.

10.jpg

Реактивы и наборы для выделения белков из клеточных органелл и компартментов

Наборы для выделения митохондрий из тканей или клеточных культур, для выделения лизосом, а также специализированный реагент Syn-PER - Synaptic Protein Extraction Reagent 
для экстракции синаптических белков из нервных тканей.
Кроме того, имеются наборы для выделения белков из различных клеточных фракций:
  • поверхностных белков - Cell Surface Protein Isolation Kit;
  • ядерных белков  - NE-PER Nuclear Protein Extraction Kit;
  • трансмембранных и полуинтегральных белков - Mem-PER Plus Membrane Protein Extraction Kit.

Кроме того, имеются наборы для выделения белков из различных клеточных фракций:
  • поверхностных белков - Cell Surface Protein Isolation Kit;
  • ядерных белков  - NE-PER Nuclear Protein Extraction Kit;
  • трансмембранных и полуинтегральных белков - Mem-PER Plus Membrane Protein Extraction Kit


11.jpg Особый интерес представляют наборы Subcellular Protein Fractionation Kits, позволяющие выделить из одного препарата с помощью последовательно
применяемых лизирующих растворов цитоплазматические, мембранные, ядерные белки и белки цитоскелета.
12.jpg
   
 13.jpg




Ингибиторы

Для предотвращения модификации и деградации белков в процессе экстракции предлагаются ингибиторы протеаз (сериновых, цистеиновых,
металлопротеиназ и др.) и фосфатаз, а также смеси ингибиторов протеаз и фосфатаз в виде жидкостей или таблеток. 

4. Реактивы для белкового анализа

 14.jpg  15.jpg  15.png


Реактивы для количественного анализа белков 

Реагенты для определения белка разными колориметрическими методами:

Наборы  для флуоресцентного определения белка:
  • Quant-iT Protein Assay и Qubit Protein Assay - для неденатурирующих условий;
  • CBQCA Protein Quantitation - для анализа в присутствии детергентов;
  • NanoOrange Protein Quantitation Assay - для анализа в присутствии восстанавливающих агентов (например, меракптоэтанола);
  • EZQ Protein Quantitation - для анализа в присутствии детергентов, денатурирующих агентов и др.

Белковые стандарты
  
Так как большинство количественных методов анализа белка требует калибровочных кривых, то Thermo Scientific (Pierce) предлагает растворы бычьего сывороточного альбумина (BSA) и
бычьего гамма-глобулина (BGG)
  в различных разведениях.  

Реактивы для анализа модификации белков

Многие белки подвергаются посттрансляционной модификации в виде фосфорилирования или гликозилирования, что необходимо для их нормальной активности. Для анализа
гликозилирования Pierce предлагает набор Glycoprotein Carbohydrate Estimation, а также стандарты для негативного и позитивного контроля гликозилирования Glycoprotein Standards.
Для  оценки фосфорилирования предназначен набор Phosphoprotein Phosphate Estimation Assay.

Наборы для анализа пептидов и аминокислот
 
Большинство методик для определения концентрации белка не обладают достаточной чувствительностью в отношении коротких пептидов, анализируемых методом масс-спектрометрии.
Для предварительной количественной оценки концентрации белковых фрагментов Pierce предлагает набор Quantitative Colorimetric Peptide Assay, в основе которого лежит колориметрический метод,
и Quantitative Fluorometric Peptide Assay, в основе которого лежит флюоресцентный метод. В качестве стандарта рекомендуется использовать Peptide Digest Assay Standard.
Для предварительного анализа аминокислот при HPLC до и после хроматографии предлагается множество реактивов, например, калибровочный стандарт для хроматографии
белковых гидролизатов Amino Acid Standard H, реагент Эллмана для колориметрического определения SH-групп, п-гидроксифенилглиоксаль для определения аргининовых остатков, нингидрин и др.

Белковые стандарты молекулярной массы для электрофореза 

В серию входят как окрашенные, так и не окрашенные стандарты для различных диапазонов молекулярной массы:
  • PageRuler Prestained Protein Ladder – от 10 до 170 кДа;
  • PageRuler Plus Prestained Protein Ladder – от 10 до 250 кДа;
  • неокрашенный маркер PageRuler Unstained Low Range Protein Ladder для анализа фрагментов в диапазоне от 3,4 до 100 кДа; 
  • специфический маркер PageRule Prestained NIR Protein Ladder для флюоресцентной визуализации в областях спектра и другие.