Molecular Probes (Thermo Fisher Scientific)

Molecular Probes (Thermo Fisher Scientific) – это флюоресцентные  реагенты, применяемые в различных областях биологии -
исследовании белков, клеточной биологии, генетике. Наиболее известные продукты: флюоресцентные красители Alexa Fluor,
наборы для внесения меток по технологии Click-iT, флюоресцентные красители SYTOX.
 f401756505505354af0b6a6a0d5cf80f.jpg

Более подробно о продукции Molecular Probes и методах с использованием флюоресцентных меток можно узнать из руководства Molecular Probes Handbook.

1. Флюоресцентные красители Alexa Fluor
2. Наборы для флюоресцентного мечения белков
3. Красители и наборы с использованием технологии Qdot для флюоресцентного мечения живых клеток
4. Реактивы для селективного окрашивания живых и мёртвых клеток 
5. Реагенты и наборы для флюоресцентного мечения клеток и биомолекул с использованием технологии Click-iT
6. Реагенты и наборы для изучения пролиферации клеток
7. Субстраты для определения ферментативной активности
8. Реактивы для флюоресцентной микроскопии
9. Реактивы для сверхразрешающей микроскопии


1. Флюоресцентные красители AlexaFluor

 pic.jpg    2.jpg  3.jpg

Alexa Fluor – самая распространенная в молекулярной биологии марка флюоресцентных красителей. Исследователям предлагается 20
различных меток с пиком флюоресценции в диапазоне от 442 до 814 нм. Эти метки совместимы со всеми основными источниками возбуждения –  
ртутными лампами, галогеновыми лампами, лампами накаливания, лазерами. Главное преимущество флюоресцентных меток Alexa Fluor – низкий
уровень фонового свечения метки, неконъюгированной с макромолекулой. Для уменьшения фонового свечения можно использовать реагенты 
ProLong или Slow Fade. Ещё одна важная характеристика флюоресцентных красителей Alexa Fluor – их высокая фотостабильность.

Кроме красителей-меток для ковалентного присоединения, под маркой Alexa Fluor предлагаются конъюгированные с флюоресцентной меткой
реагенты для вторичной детекции – первичные антитела, вторичные антитела, стрептавидин,конъюгаты для исследования строения и физиологии клеток (например,
меченый фаллоидин для связывания с актином или меченый аннексин V для изучения апоптоза). Также Molecular Probes предлагает наборы, в состав
которых входят красители Alexa Fluor – для сайт-специфического мечения белков (технологии Zenon и SiteClick), для нуклеиновых кислот различных типов,
для анализа клеточной физиологии (пролиферация, апоптоз, цитотоксичность).

Красители Alexa Fluor доступны в различных формах для мечения биополимеров и их низкомолекулярных производных. Наиболее популярны аминореактивные
красители, но также предлагаются тиол-реактивные, альдегид-реактивные и карбоксил-реактивные формы.

2. Наборы для флюоресцентного мечения белков
 4.jpg  

     




     

Кроме упоминавшихся наборов для специфического мечения белков по технологии Zenon и SiteClick), Molecular Probes предлагает широкий выбор наборов для неспецифического мечения белков. Наборы APEX– для присоединения флюоресцентной метки к сверхмалым количествам (10-20 мкг) IgG. В наборах используется колоночная технология, при которой иммуноглобулин связывается с сорбентом в микроколонке, отмывается буфером и конъюгируется с аминореактивной меткой.Для рутинного мечения антител и других белков в различных концентрациях имеются наборы с различными флюоресцентными метками. Стоит отметить наборы SAIVI Rapid Antibody Labeling Kits для использования меченых антител в экспериментах на животных in vivo.

3. Красители и наборы с использованием технологии Qdot

 5.jpg
 







Флюоресцентные пробы с технологией Qdot используются в проточной цитометрии, для окрашивания in vivo и фиксированных клеток и в других областях. В основе технологии Qdot лежит использование нанокристаллов, содержащих молекулы флюорофора, окруженные  полупроводниковой оболочкой. Поскольку испускание света qdot-кристаллом происходит в очень узком диапазоне, данная методика удобна при мультиплексном окрашивании, так как не происходит перекрывание одного цвета другим. Другая особенность проб Qdot – высокая стабильность, что удобно при анализе in vivo. Molecular Probes предлагает широкий выбор продуктов с технологией Qdot – красители Qdot ITK quantum dots, конъюгаты с красителями и наборы для мечения.

4. Реактивы для селективного окрашивания живых и мёртвых клеток

 6.jpg





Molecular Probes предлагает несколько серий продукции для селективного окрашивания или мечения флюоресцентными метками живых клеток. В линейке LIVE/DEAD Cell Viability имеются реагенты и наборы для окрашивания клеток млекопитающих, дрожжей, грибов и бактерий. В наборы LIVE/DEAD, как правило, входят два флюоресцентных красителя, дифференцированно окрашивающих живые и мертвые клетки. Эти наборы применяются в микроскопии и проточной цитометрии.

Наиболее бюджетные варианты витальных красителей – MTT на основе тетразола и резазурин. Также на основе резазурина предлагаются красители Presto Blue и alamar Blue, которые в 10-100 раз чувствительнее и в 4-6 раз быстрее окрашивают клетки. Немаловажно, что резазуриновые красители сохраняют жизнеспособность клеток и совместимы с феноловым красным, входящим в состав питательных сред.

Для отличия живых и мёртвых клеток при проточной цитофлюориметрии предназначены красители SYTOX и Cell Trace Calcein.


5. Реагенты и наборы с использованием технологии Click-iT

 7.jpg



   



   
Технология Click-iT базируется на клик-химии – получении химических веществ путём соединения модульных элементов. В результате получаются флюоресцентные метки небольших размеров, легко проникающие внутрь клетки и обладающие высокой селективностью и низким фоновым свечением. Наборы и красители с технологией Click-iT используются в микроскопии и проточной цитометрии для мечения белков, нуклеиновых кислот и других биополимеров, а также для изучения физиологии клетки. 

6. Реагенты и наборы для изучения пролиферации клеток

 8.jpg  9.jpg  10.jpg

Molecular Probes предлагает широкий спектр реагентов для анализа различных физиологических состояний клеток.
Наборы Cell Trace – для перманентного внесения в клетки красителя с целью отслеживания процессов деления. При этом не происходит никаких изменений
в физиологии и морфологии клетки.

Наборы CyQUANT Cell Proliferation Assays также содержат перманентный зелёный флоресцентный краситель, который взаимодействует с ДНК. Поскольку
количество ДНК в клетке постоянно, использование данного набора очень удобно для быстрого и точного подсчёта клеток.

Методика FUCCI – для определения стадии клеточного цикла и заключается во внедрении генетической конструкции, кодирующей 2 цветных флюоресцентных
белка в клетку. В зависимости от стадии клеточного цикла тот или иной белок деградирует, и клетка флюоресцирует зелёным на стадиях S, G2 и М или красным
на стадии G1. Между стадиями G1 и S, когда присутствуют оба белка, клетка приобретает желтую окраску.

Реагенты Cell ROX – для качественного и количественного определения активных форм кислорода в клетке. Они используются в микроскопии и проточной цитометрии.

7. Субстраты для определения ферментативной активности

 11.jpg


Molecular Probes предлагает реактивы и наборы для определения ферментативной активности, базирующиеся на химии реактивов Amplex Red и Amplex Ultra Red. Это стабильные и чувствительные субстраты с низким фоновым свечением, в отличие от субстратов, используемых в колориметрических методах. В основе этой методики – реакция между бесцветным реактивом Amplex Red и перекисью водорода, что приводит к образованию флюоресцентного продукта с максимумом испускания при 585 нм.


8. Реактивы для флюоресцентной микроскопии

 12.jpg  13.jpg




Molecular Probes предлагает реактивы, применяемые для визуализации различных объектов при флюоресцентной микроскопии.
Фиксированные в формальдегиде клетки нуждаются в пермеабилизации (увеличении проницаемости мембраны) для облегчения связывания красителя или антител с внутриклеточными структрурами. 
Набор Image-iT предназначен для фиксации клеток без разрушения клеток и внеклеточных структур и последующей пермеабилизации клеток. Отрицательно заряженные молекулы красителей могут неспецифически взаимодействовать с положительно заряженными структурами в клетках и тем самым давать фоновую флюоресценцию. 
Реагенты Image-i TFX Signal Enhancer и Block Aid предназначены для снижения неспецифической фоновой флюоресценции.
Для получения достоверных результатов при флюоресцентной микроскопии необходима регулярная калибровка инструментов. Molecular Probes предлагает наборы флюоресцентных красителей для калибровки флюоресцентных микроскопов.


9. Реактивы для сверхразрешающей микроскопии

 14.jpg  




Продукция Molecular Probes широко применяется при сверхразрешающей микроскопии (SRM – super-resolution microscopy) –
оптической технике, предназначенной для получения картины, сопоставимой с электронной микроскопией. Традиционная
микроскопия в сочетании с традиционными флюорофорами в силу законов оптики (дифракционные ограничения)
не предназначены для получения картинок с разрешением свыше 200 нм. Специальные реагенты, представляющие собой
комбинации зондов-активаторов и зондов-репортеров в сочетании со специальным оборудованием (например,
микроскоп STORM – со стохастической оптической реконструкцией) дают картину с разрешением порядка 20 нм.