Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) – продукция для молекулярной и клеточной биологии

 1.png  1. Реагенты для трансфекции
 2. Плазмиды, ферменты и наборы для клонирования
 3. Продукция GeneArt для синтеза генов и редактирования генома
 4. Программное обеспечение Vector NTI для клонирования in silico
 5. ДНК-модифицирующие ферменты Anza
 6. Наборы для выделения ДНК
 7. Ферменты, наборы и мастер-миксы для ПЦР и ОТ-ПЦР
 8. Антитела
 9. Оборудование для анализа клеток: цитометры и счетчики клеток
      f401756505505354af0b6a6a0d5cf80f.jpg




   


1. Серия реагентов для трансфекции Lipofectamine

 2.png   




Один из наиболее известных продуктов Invitrogen – серия реагентов для трансфекции Lipofectamine. Это липидные 
наночастицы, полученные с помощью современной технологии. Самый универсальный продукт серии - Lipofectamine 
3000 обладает более высокой эффективностью трансфекции по сравнению с его предшественником Lipofectamine 2000
Протокол трансфекции с Lipofectamine крайне прост и универсален для большинства стандартных клеточных линий, 
таких как HEK293, HeLa, HepG2 и др.
Другие продукты этой серии:

  • Lipofectamine Messenger MAX для трансфекции мРНК в нервные клетки;
  • Lipofectamine RNAiMAX и Invivofectamine 3.0 для трансфекции малых интерферирующих РНК;
  • Lipofectamine CRISPRMAX Cas9 для доставки в клетку белков CRISPR-Cas9.


2. Плазмиды, ферменты и наборы для клонирования

  • ТА-клонирование

  3.jpg   

   


Разновидность традиционного клонирования, основанная на свойстве Taq-полимеразы присоединять аденин к 3’-концу
ПЦР-продукта. В состав наборов TACloning входит линеаризованный вектор pCR 2.1 или pCRII, несущий на 3’-концах тимидин,
а также высокоэффективная ДНК-лигаза Express LinkT4 DNA Ligase, сшивающая вставку и вектор за 15 минут. Эта лигаза
также предлагается в виде отдельного продукта.

  • Клонирование по тупым концам

4.jpg  5.jpg 




Использование высокоточной ДНК-полимеразы Pfu не даёт продуктов амплификации с 3’-концевыми А. Для клонирования таких ПЦР-продуктов предлагается серия наборов Zero Blunt Cloning, также содержащих ДНК-лигазу Express Link. Клонирование осуществляется в линеаризованный вектор pCR-Blunt.

  • Клонирование по технологии TOPO

 6.jpg



   
Простой (всего 3 стадии), быстрый (5’ при комн. температуре) и надёжный (до 95% клонов со вставкой) способ клонирования. В основе метода – использование фермента топоизомеразы I, выполняющей функции рестриктазы и ДНК-лигазы. Клонирование вставки в векторную плазмиду серии TOPO происходит по специфическим сайтам, распознаваемым топоизомеразой I. 

Наборы для клонирования с использованием технологии TOPO:

  • для клонирования по тупым концам - Zero BluntTOPO PCR Cloning;
  • для ТА-клонирования - TOPO TA Cloning;
  • для клонирования больших фрагментов – до 10 тыс. п.н. - TOPO XL PCR Cloning.

Также предлагаются наборы, содержащие векторные плазмиды ТОРО для экспрессии клонированных генов в различных системах. Это векторы рЕТ
для E.coli, pcDNA для клеток млекопитающих, pYES для дрожжей, pFastBac HBM для клеток насекомых и др. Векторы pENTR/D-TOPO и pCR8/GW/TOPO – для клонирования по технологии TOPO и содержат сайты рекомбинации для Gateway-клонирования.

  • Клонирование по технологии Gateway

7.jpg 





В основе технологии лежит сайт-специфическая рекомбинация между векторной плазмидой, несущей
сайты attB или attL, и фрагментом ДНК (например, продуктом ПЦР), несущим сайты attP или attR.
Соответственно, реакция называется BP или LR и катализируется смесью ферментов BP-Clonase или
LR-Clonase. BP-клонирование применяется для получения экспрессионных клонов из ПЦР-продуктов,
LR-клонирование  используется для переноса вставки из промежуточного вектора (шатл-вектора)
в экспрессионный вектор. Invitrogen предлагает очень широкую линейку векторов для Gateway-клонирования
в прокариотических и эукариотических клетках, а также для экспрессии in vitro.



3. Технологии и продукция GeneArt для получения синтетических генов

 8.jpg 9.jpg 

GeneArt – технологии и продукция для клонирования нового поколения для теоретической разработки и практического воплощения практически любой
генно-инженерной конструкции. Наборы серии Seamless Cloning и Genetic Assembly - для клонирования конструкций, включающих в себя до 10 фрагментов, 
без промежуточных ПЦР и рестриктазной обработки. Например, набор GeneArt Seamless PLUS Cloningт и Assembly - для сборки и клонирования
последовательности до 40 тыс.п.н. из 4 отдельных фрагментов. Реакция происходит в одном объёме, эффективность клонирования – до 90%.
Наборы серии GeneArt Site-Directed Mutagenesis - для сайт-специфического мутагенеза в генно-инженерных конструкциях. Фермент CorrectAZE и
наборы с этим ферментом предназначены для получения генно-инженерных конструкций с минимальным количеством ошибочных нуклеотидов. 


4. Программное обеспечение Vector NTI для клонирования in silico

 10.jpg  




Программное обеспечение Vector NTI предназначено для работы с базами данных последовательностей ДНК и РНК – как пользовательскими, так и общеизвестными типа GenBank, для анализа последовательностей, для разработки стратегии клонирования (дизайн праймеров, сайт-специфический мутагенез), а также для валидации результатов клонирования и секвенирования. В зависимости от экспериментальных задач и пользовательского уровня исследователь может выбрать пакет Express или Advanced.



5. ДНК-модифицирующие ферменты Anza


 11.jpg   




В серию Anza входят 128 рестриктаз, наборы с ДНК-лигазой Т4, полинуклеотидкиназой, щелочной фосфатазой, а также наборы Anza DNA End Repair и Anza DNA Blunt End для получения тупых концов после рестрикции. Все ферменты Anza работают в одном и том же буфере (предлагается в бесцветной и красной модификации), что очень удобно при клонировании с рестрикцией-лигированием.



6.  Наборы для выделения ДНК
 

 12.jpg 13.jpg   14.jpg

Invitrogen предлагает наборы для выделения различных типов ДНК из различных биологических материалов – растительных и животных тканей,
биологических жидкостей, бактерий , вирусов, клеточных культур, а также из сверхмалых биологических образцов для судебно-медицинских целей.
Кроме наборов для выделения геномной ДНК, есть наборы для выделения внеклеточной ДНК, очистки продуктов ПЦР, экстракции из агарозного геля,
выделения биотинилированных цепей ДНК и очистки олигонуклеотидов и малых фрагментов ДНК. Максимальное разнообразие в зависимости от
источника и типа ДНК – в линейке наборов PureLink, основанных на колоночной технологии и выпускаемых как в формате отдельных колонок, так и в
формате 96- и 384-луночных плашек. Продукция GeneCatcher- для выделения геномной ДНК из крови с помощью магнитных частиц. Технология
ChargeSwitch используется как в колоночных наборах, так и в наборах с магнитными частицами и основана на изменении заряда сорбента и его
ДНК-связывающих свойств в зависимости от рН. Реагент DNAzol предназначен для выделения геномной ДНК и выпускается в трёх вариантах –
DNAzol для клеточных культур и животных тканей, DNAzol BD для крови и Plant DNAzol для растительных тканей.


7.  Ферменты, наборы и мастер-миксы для ПЦР и ОТ-ПЦР

15.jpg  Invitrogen предлагает реагенты, наборы реагентов и готовые смеси (мастер-миксы) для ПЦР. Для рутинной ПЦР предлагается обычная Taq-полимераза. Для ПЦР с горячим стартом – Taq-полимераза Platinum в виде отдельного фермента или мастер-микса. Для высокоточной ПЦР у Invitrogen имеется линейка продукции AccuPrime – Taq-полимераза, Pfu-полимераза, набор для амплификации GC-богатых областей, супермиксы. 

Полимераза Platinum SuperFi обладает точностью, в 100 раз превышающую таковую стандартной Taq-полимеразы. Она, наряду со смесью ферментов Elongase предназначена, в первую очередь, для амплификации длинных фрагментов – до 20-30 т.п.н.

Также у Invitrogen имеются наборы для мультиплексной ПЦР на основе ДНК-полимераз AccuPrime и PlatinumSuperFi.

Для синтеза кДНК Invitrogen предлагает линейку продуктов на основе семейства обратных транскриптаз SuperScript. Отличительная особенность этих обратных транскриптаз Superscript – высокая термостабильность (до +55 С). Кроме того, обратная транскриптаза последнего поколения SuperScript IV отличается высокой скоростью и точностью синтеза.

Для одношаговой обратной транскрипции-ПЦР Invitrogen предлагает наборы SuperScript One-Step RT-PCR, в состав которых, кроме обратной транскриптазы SuperScriptIII, входит Taq-полимераза из линейки Platinum.


8. Антитела

Более 48000 первичных и вторичных антител. Если требуемые антитела отсутствуют в линейке продукции – они могут быть получены на заказ.
Отдельно надо отметить технологию ABfinity. По этой технологии сперва иммунизируют кроликов, анализируют функциональность антител, а затем клонируют
гены этих антител в экспрессионные векторы и трансфицируют этими векторами клеточные линии с целью наработки антител. 


9. Оборудование для клеточных исследований

 16.jpg Проточные цитометры Attune

Принцип работы проточных цитометров AttuneNxT –ультразвуковая фокусировка потока, что позволяет минимизировать
расход образца и реагентов и повысить скорость и точность измерения. Эти цитометры позволяют определить размер и
зернистость клеток, а также флюоресценцию антител или других меток. Предназначены для иммунофенотипирования,
исследования стадий клеточного цикла, микробиологических исследований и др. Цитометры, входящие в линейку AttuneNxT,
отличаются числом лазеров (от 1 до 4) и детекторов флюоресценции (от 4 до 14 цветов).
 17.jpg Счетчики клеток Countess

Автоматические счётчики клеток Countess II и Countess II FL крайне просты в использовании и предназначены для подсчёта
числа клеток, оценки количества живых клеток и определения среднего размера клеток. Модель Countess II FL может быть
оснащена двумя световыми кубами EVOS, что даёт возможность анализа клеток по 20 флюоресцентным каналам.