Реактивы и среды Sigma для работы в лабораториях экстракорпорального оплодотворения

Сегодня все большее распространение в нашей стране, как и во всем мире, получает метод лечения бесплодия путем экстракорпорального оплодотворения преовуляторных ооцитов и переноса дробящихся эмбрионов в полость матки пациентки (метод ЭКО и ПЭ).
Одним их важнейших этапов этой программы, определяющим ее успех, является культивирование ооцитов и их подготовка к оплодотворению.
Компания Sigma, являющаяся ведущим мировым производителем химических реактивов, предлагает широкий спектр реактивов и сред, предварительно протестированных на мышиных эмбрионах и предназначенных для использования в различных технологиях ЭКО.
Ключевым моментом в подготовке ооцитов к оплодотворению in vitro является подбор адекватных культуральных сред, максимально приближенных по всем параметрам к естественным жидкостям, в которых ооциты и эмбрионы человека находятся in vivo.
Sigma предлагает культуральные среды М16 и М2 (см. табл.) для культивирования оцитов в СО2-инкубаторе и проведения манипуляций с ними в комнатной атмосфере. Среды стерильно профильтрованы и протестированы на содержание эндотоксинов, поддержание постоянного рН обеспечивает присутствие бикарбонатного буфера в среде M16 и HEPESa в М2.
Среди компонентов культуральных сред фирмы Sigma представлены энергетические субстраты, такие как пируват, лактат и глюкоза (см. табл.); антибиотики - калиевая соль пенициллина G и стрептомицин сульфат; альбумин; HEPES. Для основы всех культуральных сред Sigma предлагает стерильную воду, которая отличается высочайшей степенью очистки и протестирована на содержание эндотоксинов, оказывающих токсическое воздействие на эмбрионы (см. табл.).
Иногда для культивирования ооцитов, а также в ходе проведения процедуры ICSI используется минеральное масло, которым покрываются капли со средой и помещенными в нее ооцитами. Sigma предлагает два типа таких масел, предназначенных специально для работы с эмбрионами в программе ЭКО (см. табл.). При культивировании под маслом замедляется испарение воды и выход СО2 из среды вне инкубатора, не происходит попадания в культуральную среду микроорганизмов и частичек пыли, а также это дает возможность культивирования в небольших каплях среды, что важно при оплодотворении спермой с небольшой концентрацией активных сперматозоидов.
В случаях тяжелых форм мужского бесплодия применяют метод интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ICSI).
Непосредственно перед проведением процедуры ICSI ооциты необходимо очистить от клеток кумулюса. Для этого используется специальный фермент гиалуронидаза (Sigma, см. табл.), который обладает литическим действием для внеклеточного матрикса, скрепляющего клетки кумулюса.
Компания Sigma также предлагает поливинилпирролидон (PVP), который применяется в ходе проведения ICSI (см. табл.). Обработанная сперма добавляется в капли с PVP. За счет его повышенной вязкости скорость движения сперматозоидов снижается в 2-3 раза, что позволяет легко манипулировать со сперматозоидами.
Одним из ключевых событий преимплантационного развития эмбриона в условиях in vivo является хетчинг бластоцисты (разрыв Zona Pellucida), после завершения которого эмбрион входит в прямой контакт с эндометрием матки. Однако в условиях in vitro бластоциста не всегда может освободиться от Zona Pellucida и возникают проблемы с имплантацией эмбриона, особенно у женщин позднего репродуктивного возраста, пациенток, которые имели множественные неудачные попытки переноса эмбрионов, а также у женщин, чьи эмбрионы имеют замедленное развитие, плохие морфологические показатели или аномальные биометрические характеристики Zona Pellucida. Таким образом встает вопрос о применении метода вспомогательного хетчинга (ВХ) для увеличения частоты имплантации у женщин, проходящих лечение бесплодия методом ЭКО.
Sigma предлагает раствор Тироде (см. табл.), применение которого является одним из существующих в настоящее время методов проведения ВХ. При этом в Zona Pellucida образуют отверстие диаметром 20-30 мкм на 2 - 3-й день после аспирации фолликулов.
В приведенной таблице отражены все реактивы и среды, предлагаемые фирмой Sigma для использования в различных технологиях программы ЭКО-ПЭ. Все реактивы имеют высокую степень очистки, протестированы на эмбрионах и, таким образом, являются наиболее оптимальными для работы с ооцитами, эмбрионами и спермой в ходе ЭКО и проведения ICSI.
Реактивы и среды Sigma, применяемые в программах ЭКО и ПЭ и для проведения ICSI. Вся приведенная в таблице продукция протестирована на эмбрионах (embryo tested).